對于基于活動、習慣、趨向性和潛水行為的測試，斑馬魚是合適的模型。斑馬魚存放在標準200升玻璃水族箱中，每個水族箱都配備了機械和生物水過濾器，設施內的溫度通過自動空調系統保持在28±1℃，從而保證了水族箱內恒定的水溫。設施內水的pH值設置為8.0，并定期檢查放置在設施天花板上的LED燈提供照明，并由電子定時器控制，以提供14h亮/10h時暗的光周期，每天兩次自由采食活食。在行為測試結束時，每個受試者都被轉移到實驗后的水族箱中，避免重復使用它們。每個實驗的受試者都在體型和年齡（10-12個月）上進行匹配。

實驗裝置的示意圖

(a)礦場試驗；(b)趨光性試驗；(c)潛水試驗；(d)淺灘試驗；(e)八角鏡測試；(f)用鏡像刺激修改的淺灘測試。綠色陰影表示用于分析魚行為的區域；

焦慮測試1：曠場測試

曠場測試在一個40 × 40厘米的白色塑料方形測試場中單獨測試了每個受試者，該測試場位于帶有紅外LED λ 980 nm 照明的背光桌子上。除了放置在開放場地上方1 m的暖白色LED燈帶外，沒有任何照明。運送到實驗室的一個小型圓形容器內，將容器輕輕地倒入競技場中心，讓魚不受干擾地探索新的環境。通過放置在開放場地上方1 m處的對紅外光敏感的相機來分析受試者的行為。相機連接到運行VisuTrack AI跟蹤軟件（該軟件以每秒5幀的速度記錄魚的位置，并用它來計算曠場實驗中通常采用的3個行為變量。第一個變量是觸動性，即距離競技場邊緣1個身體長度內所花費的時間。該變量代表了對競技場邊緣的偏好程度，因為它基于二分空間偏好：在整個測試期間，魚可能位于邊緣，也可能不位于邊緣。這種方法經常被使用，因為二分偏好不太可能受到混雜參數（例如受試者的運動量）的影響。第二個變量是活動，以移動距離來衡量，第三個變量代表另一種活動衡量標準，以1個身體長度/秒內移動所花費的時間為閾值。所有變量均保存在1分鐘時間段內，以分析行為的時間模式。

焦慮測試2：趨向性測試

趨光性測試在一個矩形底座的玻璃裝置（50 cm × 20 cm，水深：12 cm）中對每條魚進行了測試。該裝置的墻壁和底部是一半白色和一半黑色，每一半都由熒光白光燈管照明。測試開始時讓受試者在設備的中央區域停留1分鐘以使其適應。適應后讓魚在裝置中不受干擾地游動30分鐘。使用放置在設備上方的相機記錄實驗。使用定制軟件對記錄進行評分，以計算每個受試者在1分鐘時間段內花費在設備白色區域的時間作為因變量。考慮到魚的空間位置可能只是兩種可能性之一（在白色或黑色部分），因變量提供了對白色部分相對于黑色部分的偏好的衡量標準，獨立于受試者游泳速度等其他特征或活動。

焦慮測試3：潛水測試

將受試者放到一個裝有20厘米水的小型新型水箱（20厘米 × 20厘米）中。該裝置的三個壁由白色有機玻璃制成，而其余一側由透明有機玻璃制成。該裝置由熒光燈照明 三腳架上的攝像機從側面透明的墻壁上記錄了魚的行為，持續時間為30分鐘。然后使用VisuTrack AI跟蹤軟件從視頻記錄中跟蹤魚的位置，計算因變量為1分鐘時間段內在設備下部25%區域游泳所花費的時間。使用這種評分系統，魚只能位于裝置的下部或上部區域。

社交性測試1：淺灘測試

斑馬魚被記錄在一個充滿10厘米水的3室裝置中（60厘米 × 20厘米 × 20厘米）。中央較大的房間（30 cm × 20 cm）容納了整個測試（30分鐘）的受試者。其中一個側室（15 cm×20 cm）容納了一組同種動物作為社交刺激，而另一個側室（15 cm×20 cm）則留空作為對照。每個側室均由熒光白光燈管照明，以確保刺激的高可見度。最初測試了15條斑馬魚以及3個同種魚作為社交刺激。使用視頻記錄記錄，實驗者對受試者靠近同種動物（2個身體長度以內）所花費的時間進行評分，并使用相同的距離標準，對靠近空區域所花費的時間進行評分。這些措施用于計算淺灘偏好的比例指數：接近刺激的時間/（接近刺激的時間 + 接近空區域的時間）。因為受試者也可以在裝置的中央、沒有選擇的部分度過時間。 與早期測試所使用的方法一致，該因變量是空間偏好的度量。然而，由于中央無選擇區域，兩個選擇區域之間的距離可能會出現問題，因為活動度低的魚可能不會注意到遠處的刺激。因此，實驗者還監測了一種活動測量，包括計算每個受試者在選擇的區域之間進行的切換（即，更活躍的魚會更頻繁地在區域之間切換）。 數據以1分鐘的時間間隔收集。

社交能力測試2：八角鏡測試

使用帶有鏡面壁的八角形裝置進行了鏡子測試，覆蓋每面墻壁的鏡子為17厘米×15厘米，裝置中的水深8厘米。裝置墻壁周圍放置的LED燈帶確保均勻的照明。將鏡子裝置放置在背光臺上（紅外LED λ 980 nm）以允許自動追蹤斑馬魚。測試過程從釋放設備中心的個體受試者開始，同時開始記錄。然后在整個測試期間（30分鐘）讓魚不受干擾。當小型群居魚將它們的鏡像視為同種動物時，它們通常傾向于在鏡子附近游泳。跟蹤軟件計算每個受試者在距離鏡子1個身體長度范圍內所花費的時間（以1分鐘的時間段為單位）。

(a)趨動性以靠近邊緣的時間來衡量，分為1分鐘的區間；(b)以移動距離衡量的活動，分為1分鐘的區間；(c)以移動所花費的時間來衡量的活動，分為1分鐘的區間；(d)根據延長測試時間（4小時）測試的移動距離測量的活性，分為30分鐘的區間，以便在標準測試時間（30分鐘）和延長測試時間之間進行比較；(e)在延長測試時間（4小時）下測試中移動所花費的時間來測量活動，分為30分鐘的區間，以便在標準測試時間（30分鐘）和延長測試時間之間進行比較。

參考文獻

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